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免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)图片
产品货号:
QN2714
中文名称:
免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)
英文名称:
SP Kit(Mouse)
产品规格:
3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。

试剂盒组成
组分3ml6ml18ml
封闭液(5%BSA)3ml6ml18ml
3% H2O23ml6ml18ml
生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液30μl60μl180μl
链酶亲和素-POD浓缩液30μl60μl180μl
稀释液10ml20ml60ml
20×DAB显色液A0.3ml0.6ml1.8ml
20×DAB显色液B0.3ml0.6ml1.8ml

保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。

操作步骤(以石蜡切片为例)
1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚:
  a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
  b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2~3次。
  c、跳过此步,直接进入下一步。
4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗小鼠IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。

对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。

注意事项
如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
相关搜索:免疫组化SP法检测试剂盒(小鼠IgG)SP Kit(Mouse)
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